原理：麥胚凝集素(WGA)是從谷物中提取出來，可以特異性的結(jié)合心肌細(xì)胞膜上的一種糖蛋白，二者結(jié)合起來可以將心肌細(xì)胞膜染出來。WGA 可以把心肌細(xì)胞膜染出來，這樣是否肥大的細(xì)胞從圖像與正常組的對比就可以看出，也可以用專門的軟件對染出的細(xì)胞進(jìn)行直徑、面積等的測量，能夠分析心肌細(xì)胞是否肥大。

試劑盒組成：

iFluor 488-WGA 染色液（即用型）

抗熒光淬滅封片劑（干固型）

DAPI（即用型）

使用方法：

1、樣本準(zhǔn)備：

1）石蠟切片：依次將切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ。取出放在通風(fēng)廚內(nèi)，酒精晾干后放入自來水中稍洗，蒸餾水洗。

2）冰凍切片：取出低溫冷凍的冰凍切片復(fù)溫后，切片浸沒于固定液中固定 10-30min，PBS 洗5min 重復(fù) 3 次。

3）細(xì)胞爬片（固定）：培養(yǎng)好的去掉培養(yǎng)液，PBS 清洗 3 次，在細(xì)胞爬片上滴加固定液固定 10- 30min，PBS 洗 5min 重復(fù) 3 次。

2、抗原修復(fù)：組織切片置于盛滿 PH 9.0 EDTA 堿性抗原修復(fù)液或者 PH6.0 檸檬酸修復(fù)緩沖液的修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)進(jìn)行抗原修復(fù)。自然冷卻后將玻片置于 PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌 3 次，每次 5min。(新鮮組織冰凍切片和細(xì)胞爬片省略此步驟）。

3、WGA 染色：組化防水筆畫圈，然后滴加 iFluor 488-WGA 染色液于 37 度染色避光孵育 30min-2h（濕盒內(nèi)放少量水），PBS 洗 5min 重復(fù) 3 次。

4、DAPI 復(fù)染細(xì)胞核：滴加 DAPI 即用型染液，避光室溫孵育 5min-20min，PBS 洗 5min 重復(fù) 3 次。

5、封片：玻片滴加適量抗熒光淬滅封片劑，輕輕的從一側(cè)蓋下蓋玻片（建議使用本試劑盒內(nèi)抗熒光淬滅封片劑 ，封片過程應(yīng)避免氣泡）。

6、鏡檢拍照：切片于熒光顯微鏡/共聚焦/多通道熒光掃描儀/多光譜成像系統(tǒng)下觀察并采集圖像。

結(jié)果：Dapi 復(fù)染細(xì)胞核呈藍(lán)色；iFluor 488-WGA 標(biāo)記陽性呈綠色

注意事項(xiàng)：

1、WGA 染料存在淬滅的可能，建議試用本試劑盒內(nèi)的抗熒光淬滅封片劑，并盡快成像。

2、對于活細(xì)胞染色，可不用固定，用 PBS 清洗掉培養(yǎng)液后，加入 WGA 染料 37 度避光 10-30min。

3、固定后的樣本（如石蠟切片），須經(jīng)過高溫修復(fù)否則會(huì)造成染色陽性結(jié)果偏弱。

4、對于細(xì)胞樣本，染色前避免使用通透液，否則會(huì)造成細(xì)胞內(nèi)（如高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)）結(jié)構(gòu)的染色。

5、WGA 染料建議分裝后-20 度保存，盡量避免反復(fù)凍融。